Руководство по созданию простого фосфатного буфера

В химии, буферрешение служит для поддержания стабильного рН, когда небольшое количество кислоты или основания вводится в раствор. Раствор фосфатного буфера особенно полезен для биологических применений, которые особенно чувствительны к изменениям рН, поскольку возможно приготовить раствор вблизи любого из трех уровней рН.

Три значения рКа для фосфорной кислоты (из CRC Справочник по химии и физике) составляют 2,16, 7,21 и 12,32. Мононатрийфосфат и его конъюгатное основание, динатрийфосфат, обычно используются для создания буферов значений pH около 7 для биологических применений, как показано здесь.

• Замечания: Помните, что pKa нелегко измерить до точного значения. Немного разные значения могут быть доступны в литературе из разных источников.

Создание этого буфера немного сложнее, чем создание буферов TAE и TBE, но этот процесс не сложен и должен занять всего около 10 минут.

Чтобы сделать ваш фосфатный буфер, вам понадобятся следующие материалы:

• Мононатрий фосфат
• Динатрийфосфат.
• Фосфорная кислота или гидроксид натрия (NaOH)
instagram viewer
• рН-метр и зонд
• Мерная колба
• Градуированные цилиндры
• Стаканы
• Перемешать бары
• Помешивая

Перед созданием буфера вы должны сначала знать, какой молярностью вы хотите его видеть, какой объем сделать и каков желаемый pH. Большинство буферов работают лучше всего при концентрациях от 0,1 М до 10 М. РН должен быть в пределах 1 единицы рН от кислотно-конъюгатного основания рКа. Для простоты этот пример расчета создает 1 литр буфера.

Используйте уравнение Хендерсона-Хассельбальха (HH) (ниже), чтобы определить, какое соотношение кислоты и основания требуется для получения буфера с желаемым pH. Используйте значение pKa, ближайшее к вашему желаемому pH; отношение относится к паре кислотно-основного конъюгата, которая соответствует этому pKa.

HH уравнение: pH = pKa + log ([основание] / [кислота])

Для буфера с pH 6,9 [Основание] / [Кислота] = 0,4898

Заменить на [Кислота] и Решить на [Основание]

Желаемая молярность буфера является суммой [Acid] + [Base].

Для 1 М буфера, [Base] + [Acid] = 1 и [База] = 1 - [Кислота]

Подставив это в уравнение отношения, начиная с шага 2, вы получите:

[Кислота] = 0,6712 моль / л

Решить для [кислоты]

Используя уравнение: [Base] = 1 - [Acid], вы можете рассчитать, что:

[База] = 0,3288 моль / л

После того, как вы использовали Henderson-Hasselbalch Чтобы рассчитать соотношение кислоты и основания, необходимое для вашего буфера, приготовьте чуть менее 1 литра раствора, используя правильные количества мононатрийфосфата и динатрийфосфата.

Используйте датчик pH, чтобы подтвердить, что правильный буфер для буфера достигнут. При необходимости отрегулируйте немного, используя фосфорную кислоту или гидроксид натрия (NaOH).

Как только желаемый рН достигнут, доведите объем буфера до 1 л. Затем разбавьте буфер по желанию. Этот же буфер может быть разбавлен для создания буферов 0,5 М, 0,1 М, 0,05 М или чего-либо промежуточного.

Вот два примера того, как можно рассчитать фосфатный буфер, как описано Клайвом Деннисоном, кафедрой биохимии в Университете Натала, Южная Африка

Требование к 0,1 М Na-фосфатному буферу, рН 7,6.

В уравнении Хендерсона-Хассельбальха pH = pKa + log ([соль] / [кислота]), соль представляет собой Na2HPO4, а кислота представляет собой NaHzPO4. Буфер наиболее эффективен при pKa, то есть в точке, где [соль] = [кислота]. Из уравнения ясно, что если [соль]> [кислота], pH будет больше, чем pKa, а если [соль]

NaH2PO4 + NaOH - + Na2HPO4 + H20.

После того как раствор был титрован до правильного значения pH, его можно разбавить (по крайней мере, в течение небольшого диапазон, так что отклонение от идеального поведения мало) до объема, который даст желаемый молярность. Уравнение HH утверждает, что отношение соли к кислоте, а не их абсолютные концентрации, определяет pH. Обратите внимание, что:

• В этой реакции единственным побочным продуктом является вода.
• Молярность буфера определяется по массе кислоты NaH2PO4, которая взвешивается, и конечному объему, до которого готовится раствор. (Для этого примера потребуется 15,60 г дигидрата на литр конечного раствора.)
• Концентрация NaOH не имеет значения, поэтому можно использовать любую произвольную концентрацию. Разумеется, он должен быть достаточно концентрированным, чтобы обеспечить требуемое изменение рН в доступном объеме.
• Реакция подразумевает, что требуется только простой расчет молярности и одно взвешивание: только один решение должно быть составлено, и весь взвешенный материал используется в буфере, то есть нет трата.

Обратите внимание, что неправильно взвешивать «соль» (Na2HPO4) в первую очередь, так как это дает нежелательный побочный продукт. Если раствор соли составлен, его pH будет выше pKa, и для понижения pH потребуется титрование кислотой. Если используется HC1, реакция будет:

Na2HPO4 + HC1 - + NaH2PO4 + NaC1,

получая NaC1 неопределенной концентрации, которая не нужна в буфере. Иногда - например, при элюировании градиентом ионной силы ионного обмена - необходимо иметь градиент, скажем, [NaC1], наложенный на буфер. Затем для двух камер генератора градиента требуются два буфера: начальный буфер (то есть буфер уравновешивания, без добавления NaC1 или с начальная концентрация NaCl) и конечный буфер, который является таким же, как исходный буфер, но который дополнительно содержит конечную концентрацию NaCl. При формировании чистового буфера необходимо учитывать общие эффекты ионов (из-за ионов натрия).

Пример, как отмечено в журнале биохимического образования16(4), 1988.

Требование к чистому буферу градиента ионной силы, 0,1 М Na-фосфатный буфер, рН 7,6, содержащий 1,0 М NaCl.

В этом случае NaC1 взвешивается и смешивается с NaHEPO4; общие эффекты ионов учитываются при титровании, и, таким образом, исключаются сложные вычисления. На 1 литр буфера NaH2PO4.2H20 (15,60 г) и NaCl (58,44 г) растворяют в примерно 950 мл дистиллированной H2O, титровали до рН 7,6 с помощью довольно концентрированного раствора NaOH (но произвольной концентрации) и доводили до 1 литровый.

Пример, как отмечено в журнале биохимического образования16(4), 1988.