TBE-буфер (Трис-борат-ЭДТА) представляет собой буферный раствор, состоящий из трис-основания, борной кислоты и ЭДТА (этилендиаминтетрауксусной кислоты). Этот буфер часто используется для электрофореза в агарозном геле при анализе продуктов ДНК, которые являются результатом амплификации ПЦР, протоколов очистки ДНК или экспериментов по клонированию ДНК.
TBE использует
TBE-буфер особенно полезен для разделения более мелких фрагментов ДНК (MW <1000), таких как небольшие продукты фермент рестрикции дайджесты. TBE имеет большую емкость буферизации и даст более четкое разрешение, чем буфер TAE. ТАЕ (трис-ацетат-ЭДТА) буфер представляет собой раствор, состоящий из трис-основания, уксусной кислоты и ЭДТА.
TBE, как правило, более дорогой, чем TAE, и ингибирует ДНК-лигазу, что может вызвать проблемы, если предполагаются последующие стадии очистки и лигирования ДНК. С помощью трех простых шагов вы узнаете, как создать буфер TBE. Создание не должно занимать более 30 минут.
Что вам нужно
Чтобы сделать буфер TBE, вам нужно всего четыре вещества. Остальные пункты в этом списке - оборудование. Требуются четыре вещества: динатриевая соль ЭДТА, трис-основание, борная кислота и деионизированная вода.
Что касается оборудования, вам понадобится рН-метр и калибровочные стандарты, в зависимости от ситуации. Кроме того, вам понадобятся стаканы или колбы на 600 и 1500 мл. Завершают ваши потребности в оборудовании градуированные цилиндры, стержни и мешалки.
Проверьте инвентарь в лаборатории, которую вы будете использовать, чтобы убедиться, что у вас есть все необходимое, прежде чем вы начнете. Нет ничего хуже, чем остановиться в процессе подготовки решения, потому что у вас закончились подходящие материалы.
Если ваша лаборатория находится в школе или на вашем рабочем месте, посоветуйтесь с соответствующим персоналом, чтобы убедиться, что у них есть все предметы на складе. Это может сэкономить ваше время и энергию в конце концов.
Вес формулы сокращен как FW. Это атомный вес элемента, умноженный на количество атомов каждого элемента в формуле, а затем сложение всех масс каждого элемента.
Сток решение ЭДТА
Решение ЭДТА должно быть подготовлено заранее. ЭДТА не войдет полностью в раствор до тех пор, пока pH не будет отрегулирован примерно до 8,0. Для 500-миллилитрового исходного раствора 0,5 М ЭДТА взвесить 93,05 г динатриевой соли ЭДТА (FW = 372,2). Затем растворите его в 400 миллилитрах деионизированной воды и отрегулируйте pH с помощью NaOH (гидроксид натрия). После этого долейте раствор до конечного объема 500 миллилитров.
Сток решение TBE
Сделайте концентрированный (5x) исходный раствор TBE, взвесив 54 грамма трис-основания (FW = 121,14) и 27,5 грамм борной кислоты (FW = 61,83) и растворение в примерно 900 миллилитрах деионизированного воды. Затем добавляют 20 миллилитров 0,5 М (молярность или концентрация) ЭДТА (рН 8,0) и доводят раствор до конечного объема 1 литр. Этот раствор можно хранить при комнатной температуре, но в старых растворах образуется осадок. Храните буфер в стеклянных бутылках и утилизируйте, если образовался осадок.
Рабочий раствор TBE
Для электрофореза в агарозном геле можно использовать TBE-буфер в концентрации 0,5x (разбавление 1:10 концентрированного исходного материала). Развести исходный раствор в 10 раз в деионизированной воде. Конечные концентрации растворенного вещества составляют 45 мМ трис-борат и 1 мМ (миллимолярный) ЭДТА. Буфер теперь готов к использованию в работает агарозный гель.