Фосфатно-солевой раствор или раствор PBS

PBS или фосфатный буфер солевой раствор буферный раствор это особенно ценно, поскольку имитирует концентрацию ионов, осмолярность и рН жидкостей человеческого организма. Другими словами, он изотоничен для человеческих растворов, поэтому он реже вызывает повреждение клеток, токсичность или нежелательные осадки в биологических, медицинских или биохимических исследованиях.

Существует несколько рецептов приготовления раствора PBS. Основной раствор содержит воду, гидрофосфат натрия и хлорид натрия. Некоторые препараты содержат хлорид калия и дигидрофосфат калия. ЭДТА также может быть добавлен в клеточный препарат для предотвращения комкования.

Фосфатно-буферный солевой раствор не идеален для использования в растворах которые содержат двухвалентные катионы (Fe²⁺, Zn²⁺) потому что могут выпадать осадки. Однако некоторые растворы PBS содержат кальций или магний. Кроме того, имейте в виду, что фосфат может ингибировать ферментативные реакции. Будьте особенно осведомлены об этом потенциальном недостатке при работе с ДНК. Хотя PBS отлично подходит для физиологии, имейте в виду, что фосфат в буферизованном образце PBS может выпасть в осадок, если образец смешать с этанолом.

Типичный химический состав 1X PBS имеет конечную концентрацию 10 мМ PO₄³⁻, 137 мМ NaCl и 2,7 мМ KCl. Вот конечная концентрация реагентов в растворе:

В зависимости от вашей цели вы можете приготовить 1X, 5X или 10X PBS. Многие люди просто покупают буферные таблетки PBS, растворяют их в дистиллированной воде и при необходимости корректируют pH с соляной кислотой или гидроксид натрия. Тем не менее, это легко сделать решение с нуля. Вот рецепты для 1X и 10X фосфатно-солевого буфера:

1. Растворить соли реагента в 800 мл дистиллированной воды.
2. Отрегулируйте рН до желаемого уровня соляной кислотой. Обычно это 7,4 или 7,2. Используйте pH-метр для измерения pH, а не pH-бумагу или другие неточные методы.
3. Добавьте дистиллированную воду до конечного объема 1 л.

Стерилизация не требуется для некоторых применений, но если вы ее стерилизуете, разлейте раствор в аликвоты и автоклавируйте в течение 20 минут при 15 фунт / кв.дюйм (1,05 кг / см).²) или используйте фильтр стерилизации.

Фосфатно-солевой буфер может быть хранится при комнатной температуре. Это может также быть охлаждено, но 5X и 10X решение может осадок при охлаждении. Если вам необходимо охладить концентрированный раствор, сначала храните его при комнатной температуре, пока не убедитесь, что соли полностью растворились. Если выпадут осадки, при нагревании температура вернет их в раствор. Срок годности охлажденного раствора - 1 месяц.

10X - концентрированный или маточный раствор, который может быть разбавлен до 1X или нормального раствора. 5X раствор должен быть разбавлен в 5 раз, чтобы сделать нормальное разбавление, в то время как 10X раствор должен быть разбавлен в 10 раз.

Чтобы приготовить 1-литровый рабочий раствор 1X PBS из 10X раствора PBS, добавьте 100 мл 10X раствора к 900 мл воды. Это только изменяет концентрацию раствора, а не грамм или молярное количество реагентов. РН не должен быть затронут.

Другим популярным буферным раствором является забуференный фосфатом физиологический раствор Дульбекко или DPBS. DPBS, как и PBS, используется для биологических исследований и буферов в диапазоне рН от 7,2 до 7,6. Может храниться при комнатной температуре. Раствор Дульбекко содержит более низкую концентрацию фосфата. Это 8,1 мМ мМ фосфат-ионов, в то время как обычный PBS - 10 мМ фосфата. Рецепт для 1x DPBS:

Растворить соли в 800 мл воды. Отрегулируйте рН до 7,2-76, используя соляную кислоту. Отрегулируйте конечный объем до 1000 мл с водой. Автоклав при 121 ° С в течение 20 минут.

• Дульбекко, Р.; и другие. (1954). "Образование зубного налета и выделение чистых линий с вирусами полиомиелита". J. Exp. Med. 99 (2): 167–182.
• «Фосфатно-буферный солевой раствор (PBS.» Cold Spring Harbor Protocols (2006). Cold Spring Harbor Laboratory Press.