TBE и TAE используются в качестве буферов в молекулярной биологии, прежде всего для электрофорез нуклеиновых кислот. Трис-буферы используются в слегка базовых условиях pH, как для электрофореза ДНК, потому что это сохраняет ДНК растворим в растворе и депротонирован, поэтому он будет притягиваться к положительному электроду и будет мигрировать через гель. ЭДТА является ингредиентом в растворе, потому что это общее хелатирующий агент защищает нуклеиновые кислоты от разрушения ферментами. ЭДТА хелатирует двухвалентные катионы, которые являются кофакторами для нуклеаз, которые могут загрязнять образец. Однако, поскольку катион магния является кофактором ДНК-полимеразы и ферментов рестрикции, концентрация ЭДТА намеренно поддерживается низкой (около 1 мМ).
Вам не нужно стерилизовать раствор. Хотя через некоторое время могут выпасть осадки, исходный раствор все еще пригоден для использования. Вы можете отрегулировать pH с помощью pH-метра и добавления по каплям концентрированных соляная кислота (HCl)
. Хорошо хранить буфер TBE при комнатной температуре, хотя вы можете фильтровать исходный раствор через 0,22-микронный фильтр для удаления частиц, которые будут способствовать осаждению.Использование 5-кратного или 10-кратного запасного раствора случайно приведет к плохим результатам, поскольку будет выделяться столько тепла. В дополнение к плохому разрешению, образец может быть поврежден.
Хотя TBE и TAE являются общими буферами электрофореза, существуют другие опции для проводящих растворов с низкой молярностью, включая литий-боратный буфер и натрий-боратный буфер. Проблема с TBE и TAE состоит в том, что буферы на основе Tris ограничивают электрическое поле, которое может использоваться при электрофорезе, потому что слишком большой заряд вызывает температуру разгона.