ТАЕ-буфер представляет собой раствор, состоящий из трис-основания, уксусной кислоты и ЭДТА (трис-ацетат-ЭДТА). Исторически это самый распространенный буфер, используемый для агарозного геля. электрофорез в анализах продуктов ДНК, полученных в результате ПЦР усиление, ДНК протоколы очистки или Клонирование ДНК эксперименты.
Этот буфер имеет низкую ионную силу и низкую буферную емкость. Лучше всего подходит для электрофореза больших (> 20 килобаз) кусочков ДНК, и его необходимо будет часто заменять или рециркулировать в течение более длительного (> 4 часа) времени работы геля. Имея это в виду, вы можете рассмотреть возможность создания нескольких пакетов буфера.
Учитывая, что буфер прост в создании и шаги могут выполняться быстро, создание более одного пакета за раз не должно быть особенно трудоемким или трудным. Используя приведенные ниже инструкции, создание буфера TAE займет всего 30 минут.
Что нужно для буфера TAE
Поскольку создание буфера TAE требует только быстрого и простого набора инструкций, количество материалов, необходимых для этого, не является чрезмерным. Вам просто потребуется динатриевая соль ЭДТА (этилендиаминтетрауксусная кислота), трис-основание и ледяная уксусная кислота.
Создание буфера также требует рН-метра и калибровочных стандартов, в зависимости от ситуации. Вам также понадобятся мензурки или колбы на 600 и 1500 миллилитров, а также градуированные цилиндры. Наконец, вам понадобится деионизированная вода, мешалки и тарелки.
В следующих инструкциях вес формулы (атомная масса каждого элемента умножается на количество атомов, затем масса каждого складывается вместе) сокращается до FW.
Приготовить базовый раствор ЭДТА
Решение ЭДТА готовится заранее. ЭДТА не перейдет полностью в раствор, пока рН не будет отрегулирован примерно до 8,0. Для 500 миллилитрового запаса раствор 0,5 М (молярность или концентрация) ЭДТА, взвешивают 93,05 г динатриевой соли ЭДТА (FW = 372,2). Растворите его в 400 миллилитрах деионизированной воды и отрегулируйте рН гидроксидом натрия (NaOH). Долейте раствор до конечного объема 500 миллилитров.
Создайте свое стоковое решение
Сделайте концентрированный (50х) исходный раствор TAE, взвесив 242 грамма трис-основания (FW = 121,14) и растворив его примерно в 750 миллилитрах деионизированной воды. Осторожно добавьте 57,1 мл ледяной кислоты и 100 мл 0,5 М ЭДТА (рН 8,0).
После этого доведите раствор до конечного объема 1 л. Этот исходный раствор можно хранить при комнатной температуре. РН этого буфера не регулируется и должен составлять около 8,5.
Подготовьте рабочий раствор буфера TAE
Рабочий раствор 1х ТАЕ-буфера получают простым разбавлением исходного раствора в 50 раз в деионизированной воде. Конечные концентрации растворенного вещества составляют 40 мМ (миллимоль) трис-ацетата и 1 мМ ЭДТА. Буфер готов для использования в агарозном геле.
Завершение
Проверьте инвентарь, прежде чем начать, чтобы убедиться, что у вас есть все вышеперечисленные материалы для буфера TAE. Ваш обслуживающий персонал должен быть в состоянии сказать вам, есть ли у него все необходимое вам на складе. Вы не хотите в конечном итоге что-то упустить в середине процедуры.