Полиморфизм длины фрагмента рестрикции (RFLP) - это молекулярный метод генетического анализа, который позволяет идентифицировать индивидуумов на основе уникальных паттернов фермент рестрикции разрезание в определенных областях ДНК.
Также называется анализом RFLP, метод использует преимущества полиморфизмы в генетических кодах отдельных людей. Несмотря на то, что все представители вида имеют по существу одинаковую генетическую структуру, эти небольшие различия объясняют различия в фенотипе, такие как внешний вид или метаболизм, между индивидуумами.
RFLP метод анализа
Техника анализа RFLP включает в себя вырезание определенной области ДНК с известной изменчивостью, с ферментами рестрикции, затем разделяют фрагменты ДНК электрофорезом в агарозном геле и определяют количество фрагментов и относительные размеры.
Фермент рестрикции - это фермент, молекула белка, которая разрезает ДНК в сайтах рестрикции. По сути, образец ДНК расщепляется и переваривается рестриктазами. Полученные фрагменты разделяются в зависимости от их длины, и структура размеров фрагментов будет отличаться для каждого отдельного испытуемого.
Полный процесс RFLP требует маркировки зонда, фрагментации ДНК, электрофореза, блоттинга, гибридизации, промывания и авторадиографии. Обнаруженная RFLP визуализируется с помощью рентгеновской пленки в авторадиографии, где фрагменты ДНК можно просматривать и анализировать после их отделения друг от друга с помощью электрофореза.
Заявка на использование RFLP
Некоторые из приложений для анализа RFLP включают в себя:
- ДНК-фингерпринтинг: Судмедэксперты могут использовать анализ RFLP для выявления подозреваемых на основе образцов доказательств, собранных на местах преступлений.
- Отцовство: RFLP также используется при определении отцовства или для отслеживания происхождения.
- Генетическое разнообразие: Техника может быть использована для изучения эволюции и миграции дикой природы, изучения моделей размножения в популяциях животных, а также выявления и диагностики определенных заболеваний.
Техника использования RFLP-детектирования вариаций в геномах является важным инструментом в картировании генома и анализе генетических заболеваний. Если в определенной хромосоме ищется местоположение определенного гена заболевания, то исследователи проанализировать ДНК членов семьи с заболеванием, а затем поискать сходные модели наследования в RFLP аллели.
Как только ген заболевания локализован, проведение RFLP-анализа на других членах семьи может выявить носителя мутантных генов или сигнализировать об общем риске заболевания. Важно отметить, что в настоящее время метод RFLP широко не используется, поскольку для анализа ДНК в криминалистике и ряде других областей используются более новые и надежные методы.
Негативные аспекты РФЛП
К сожалению, метод анализа RFLP утомителен и медленен. Помимо необходимости большого количества образца ДНК - образец обычно должен быть размером примерно с четверть, что Относительно большой для образцов ДНК - этот процесс, от маркировки зондов до промывки и авторадиографии, может занять до полного месяца полный.
Результаты проекта «Геном человека» в значительной степени заменили потребность в RFLP. Проект позволил определить всю последовательность ДНК, обнаруженную в клетках человека, геном человека, и идентифицировать все гены в геноме человека.